title: Generation of Danio rerio serotonin transporters mutants using CRISPR/Cas9 technology
metadata.name: dc.contributor.advisor
metadata.value: Толкунова Елена Николаевна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.author
metadata.value: Кисель Элана Вадимовна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.author
metadata.value: Kysil Elana
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.contributor.editor
metadata.value: Мамон Людмила Андреевна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.editor
metadata.value: Mamon Liudmila Аndreevnа
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.date.accessioned
metadata.value: 2018-07-26T15:29:21Z
metadata.lang: -
metadata.name: dc.date.available
metadata.value: 2018-07-26T15:29:21Z
metadata.lang: -
metadata.name: dc.date.issued
metadata.value: 2018
metadata.lang: -
metadata.name: dc.identifier.other
metadata.value: 044136
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.identifier.uri
metadata.value: http://hdl.handle.net/11701/14355
metadata.lang: -
metadata.name: dc.description.abstract
metadata.value: Технология CRISPR/Cas9 – новейший метод редактирования геномов, основанный на адаптивном иммунитете прокариот. Для её применения необходим особый РНК-гид, направляющий эффекторную нуклеазу этой системы к специфической мишени в геноме, и сама нуклеаза Cas9, либо же последовательности для их синтеза непосредственно в клетке (плазмидные векторы). Эти элементы доставляют в клетки, геном которых хотят изменить. Cas9 вносит в ДНК двунитевые разрывы, репарация которых может идти по двум путям и сопровождается появлением делеций и инсерций или гомологичной рекомбинацией с донорной последовательностью. В данной работе мы впервые использовали плазмидные векторы для технологии CRISPR/Cas9 для внесения изменений в геном рыбы Danio rerio.  Традиционно такие плазмиды используют на клеточных культурах животных, однако они показали значительную эффективность и при получении мутантов у Mus musculus и Drosophila melanogaster. Гены slc6a4a и slc6a4b кодируют у данио транспортеры серотонина, и их выбор связан с нашим интересом в области нейрофизиологии и поведения данио. В ходе данной работы был освоен ряд методов, необходимых для работ по редактированию генома, сконструировали плазмиды для получения делеций в генах транспортеров серотонина у данио, проведены микроинъекции данных конструкций в эмбрионы на ранних этапах развития и показано наличие экспрессии генов, содержащихся на плазмидах, in vivo в живых эмбрионах после инъекции. Кроме этого, был начат анализ возможных мутаций в целевых генах у полученных в экспериментах рыб.
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.description.abstract
metadata.value: CRISPR/Cas9 technology is the newest genome editing method based on the adaptive immunity of prokaryotes. A special guide RNA directing effector nuclease to the specific target in the genome and nuclease Cas9 (or templates for their synthesis in the cell, as plasmids) are required for the application of this technology. These elements need to be delivered into cells which genome we want to edit. Cas9 introduces double strand breaks into target DNA and their reparation can be accompanied by the emergence of indels or homologous recombination with donor template. In this work we have used CRISPR/Cas9 plasmid vectors for the genome editing in Danio rerio (zebrafish) for the first time. Traditionally, such plasmids were used in cell cultures, but they also demonstrated considerable efficiency in generation of mutant Mus musculus and Drosophila melanogaster. slc6a4a and slc6a4b genes encode zebrafish serotonin transporters, and our choice of these genes were due to the interest in zebrafish neurophysiology and behavior. We have mastered methods required for the genome editing, constructed plasmids for generation of deletions in serotonin transporters genes in zebrafish, microinjected these plasmids into early zebrafish embryos and shown expression of plasmid genes in vivo in alive embryos after injection. Moreover, we have begun analysis of possible target mutations in fish obtained during the experiment.
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.language.iso
metadata.value: ru
metadata.lang: -
metadata.name: dc.subject
metadata.value: технология CRISPR/Cas9
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: редактирование генома
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: Danio rerio
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: кольцевая плазмида
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: Px458
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: транспортер серотонина
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: CRISPR/Cas9 technology
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: genome editing
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: Danio rerio
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: circular plasmid
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: Px458
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: serotonin transporter
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.title
metadata.value: Generation of Danio rerio serotonin transporters mutants using CRISPR/Cas9 technology
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.title.alternative
metadata.value: Использование технологии CRISPR/Cas9 для получения мутантов по генам транспортеров серотонина у Danio rerio
metadata.lang: ru_RU
resources.filename: VKR_Elana_Kisel_FINAL.pdf
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/14355/1/VKR_Elana_Kisel_FINAL.pdf
resources.format: Adobe PDF
resources.description: Article
resources.size: 1,52 MB
resources.filename: reviewSV_Otzyv_rukovoditelya_Kisel.PDF
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/14355/2/reviewSV_Otzyv_rukovoditelya_Kisel.PDF
resources.format: Adobe PDF
resources.description: ReviewSV
resources.size: 123,95 kB
resources.filename: reviewSV_Elana_Kisel_recenziya_Tolkunovoj.docx
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/14355/4/reviewSV_Elana_Kisel_recenziya_Tolkunovoj.docx
resources.format: Microsoft Word XML
resources.description: ReviewRev
resources.size: 22,82 kB
resources.filename: reviewSV_stt08373_Tolkunova_Elena_Nikolaevna_(reviewer)(En).txt
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/14355/5/reviewSV_stt08373_Tolkunova_Elena_Nikolaevna_%28reviewer%29%28En%29.txt
resources.format: Text
resources.description: ReviewRev
resources.size: 6,13 kB
resources.filename: reviewSV_stt08373_Tolkunova_Elena_Nikolaevna_(reviewer)(Ru).txt
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/14355/6/reviewSV_stt08373_Tolkunova_Elena_Nikolaevna_%28reviewer%29%28Ru%29.txt
resources.format: Text
resources.description: ReviewRev
resources.size: 12,79 kB