title: Elaboration of expression system for recombinant proteins in Enterococcus spp. cells
metadata.name: dc.contributor.advisor
metadata.value: Соколов Алексей Викторович
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.advisor
metadata.value: Sokolov Aleksej Viktorovic
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.contributor.author
metadata.value: Егидарова Елена Юрьевна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.author
metadata.value: Egidarova Elena Urevna
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.contributor.editor
metadata.value: Коженкова Елена Васильевна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.editor
metadata.value: Kozenkova Elena Vasilevna
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.date.accessioned
metadata.value: 2021-03-24T15:08:30Z
metadata.lang: -
metadata.name: dc.date.available
metadata.value: 2021-03-24T15:08:30Z
metadata.lang: -
metadata.name: dc.date.issued
metadata.value: 2019
metadata.name: dc.identifier.other
metadata.value: 047822
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.identifier.uri
metadata.value: http://hdl.handle.net/11701/25901
metadata.lang: -
metadata.name: dc.description.abstract
metadata.value: В настоящее время актуален поиск новых систем экспрессии рекомбинантных генов в клетках самых разных микроорганизмов. Результаты этих исследований могут в перспективе способствовать созданию рекомбинантных штаммов энтерококков, которые могут быть применены в качестве «живых вакцин» - безопасных пробиотических штаммов, экспрессирующих антигенные белки патогенных бактерий.
  В настоящей работе на основе вектора pAT29 была создана рекомбинантная плазмида, содержащая ген флуоресцентного белка TurboRFP, помещенный под контроль промотора гена entA пробиотического штамма E.faecium L-3.
  Штаммы E.coli JM109, содержащие созданную плазмиду, обладали характерным флуоресцентным фенотипом за счет экспрессии гена turborfp. Методом электропорации плазмида была внедрена в клетки Enterococcus faecium A64, в результате чего был получен штамм, содержащий рекомбинантную плазмиду, однако проявлений флуоресцентного фенотипа не наблюдалось. В качестве контроля для электропорации штамма E.faecium A64 была использована плазмида pBSU101, содержащая ген зеленого флуоресцентного белка egfp. В результате был получен штамм, способный экспрессировать ген egfp, что выражалось в появлении флуоресценции у колоний энтерококка. Таким образом, было определено, что созданная рекомбинантная плазмида может быть использована для доставки целевых генов в клетки грамположительных и грамотрицательных бактерий. При изучении стабильности плазмиды pBSU101 в клетках E.faecium A64 было показано, что при отсутствии селективного фактора в среде происходит постепенная элиминация вектора из клеток энтерококков.
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.description.abstract
metadata.value: Nowadays, the active search for new systems for the expression of recombinant genes in cells of various microorganisms is actual. In the future the results of these studies may contribute to the creation of recombinant strains of enterococci, which could be used as "live vaccines" - safe probiotic strains expressing the antigenic proteins of pathogenic bacteria.  In the present work, a recombinant plasmid was created based on the vector pAT29. The plasmid contains the promoterless copy of the gene of fluorescent protein TurboRFP, placed under the control of the promoter of the entA gene of probiotic E.faecium L-3 strain.
  E. coli JM109 strains, containing the created plasmid had a specific fluorescent phenotype due to the expression of the turborfp gene. The plasmid was introduced into Enterococcus faecium A64 cells by electroporation. As a result an enterococcal strain, containing a recombinant plasmid was obtained; however, no fluorescence phenotype appearance was observed. As a control for electroporation of the strain E.faecium A64, the plasmid pBSU101 containing the gene for green fluorescent protein eGFP was used. As a result, a strain capable to express the egfp gene was obtained, and fluorescence of enterococcal colonies was detected.
  Thus, it was determined that the generated recombinant plasmid could be used to deliver the target genes into cells of gram-positive and gram-negative bacteria. During studying of the stability of the plasmid pBSU101 in E.faecium A64 cells, it was shown that in the absence of a selective factor (antibiotic) in the medium, the vector is gradually eliminated from enterococcal cells.
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.language.iso
metadata.value: ru
metadata.name: dc.subject
metadata.value: Энтерококки
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: рекомбинантные гены
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: энтероцин А
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: Enterococcus
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: enterocin A
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: recombinant genes
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.title
metadata.value: Elaboration of expression system for recombinant proteins in Enterococcus spp. cells
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.title.alternative
metadata.value: Разработка системы экспрессии рекомбинантных генов в клетках Enterococcus spp.
metadata.lang: ru_RU
resources.filename: Egidarova_VKR.pdf
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/25901/1/Egidarova_VKR.pdf
resources.format: Adobe PDF
resources.description: Article
resources.size: 756,12 kB