title: Molecular and genetic characteristics of influenza-vectored vaccine strain expressing protective proteins from different phases of Mycobacterium tuberculosis life cycle
metadata.name: dc.contributor.advisor
metadata.value: Писарева Мария Михайловна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.author
metadata.value: Кучур Олег Александрович
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.author
metadata.value: Kuchur Oleg
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.contributor.editor
metadata.value: Романовская Екатерина Вячеславовна
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.contributor.editor
metadata.value: Romanovskaia Ekaterina Viacheslаvovnа
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.date.accessioned
metadata.value: 2018-07-26T15:17:39Z
metadata.lang: -
metadata.name: dc.date.available
metadata.value: 2018-07-26T15:17:39Z
metadata.lang: -
metadata.name: dc.date.issued
metadata.value: 2018
metadata.name: dc.identifier.other
metadata.value: 014232
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.identifier.uri
metadata.value: http://hdl.handle.net/11701/12324
metadata.lang: -
metadata.name: dc.description.abstract
metadata.value: Несмотря на существующие успехи в борьбе с туберкулёзом, проблема остается актуальной уже более века. Эффективность единственной противотуберкулезной вакцины БЦЖ вызывает вопросы и сомнения, а потому актуальной является разработка новых противотуберкулёзных вакцин, направленных на предотвращение развития открытых форм заболевания и реактивации латентных очагов эндогенной инфекции. Одним из перспективных подходов создания защиты против туберкулёза является разработка мукозальной вакцины на основе гриппозного вектора, экспрессирующего белки различных фаз жизненного цикла M. tuberculosis. Интраназальная иммунизация вирусным вектором обеспечивает доставку антигенов M. tuberculosis в эпителиальные и антиген-презентирующие клетки респираторного тракта, что приводит к формированию системного противотуберкулезного иммунного ответа.      Целью данной работы была характеристика гриппозного вектора с укороченным белком NS1, содержащего вставку туберкулезных антигенов TB10.4 и HspX.  Нами был проведен анализ генетической стабильности вставки антигенов M. tuberculosis в гене NS вируса A/PR8/NS124-TB10.4-2A-HspX на протяжении последовательных пассажей в клетках Vero и куриных эмбрионах методом ОТ-ПЦР с электрофорезной детекцией. В процессе серии пассажей методом предельных разведений был получен генетически стабильный вариант, сохранявший полноразмерную вставку. Методом вестерн-блот с иммунодетекцией NS1-специфичными антителами была показана экспрессия химерного белка NS1-TB10.4-2A-HspX с теоретической молекулярной массой 45 кДа в клетках, зараженных пассажными вариантами вируса A/PR8/NS124-TB10.4-2A-HspX. По результатам масс-спектрометрического анализа в составе химерного белка были обнаружены пептиды, соответствующие NS1 (5 фрагментов), HspX (6 фрагментов) и TB10.4 (1 фрагмент). При интраназальном введении мышам C57/black/6  в дозе 6 lg ЭИД50/мышь вакцинный штамм обладал ограниченной способностью размножения в легких животных до титров 2,0 – 2,3 lg ЭИД50/мл, не вызывая при этом гибели животных и снижения массы тела, т.е. являлся аттенуированным по сравнению с исходным штаммом A/PR8/34.      В результате выполненной работы получен генетически стабильный рекомбинантный штамм A/PR8/NS124-TB10.4-2A-HspX, обеспечивающий экспрессию антигенов M. tuberculosis при заражении чувствительных клеток. Штамм безопасен для лабораторных животных и может быть использован в качестве вакцинного штамма-кандидата для получения векторной противотуберкулезной вакцины.
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.description.abstract
metadata.value: Despite the existing successes in the treatment of tuberculosis, the problem remains relevant for more than a century. The effectiveness of the only anti-tuberculosis vaccine BCG raises questions and doubts, and therefore it is important to develop new anti-tuberculosis vaccines aimed at preventing the development of open forms of the disease and reactivation of latent foci of endogenous infection. One of the promising approaches to creating protection against tuberculosis is the development of a mucosal vaccine based on the influenza vector expressing proteins of different phases of M. tuberculosis life cycle. Intranasal immunization with the viral vector ensures the delivery of M. tuberculosis antigens to the epithelial and antigen-presenting cells of the respiratory tract, which leads to the formation of a systemic antituberculous immune response.   The purpose of this study was to characterize the influenza vector with a truncated NS1 protein containing an insert of tuberculosis antigens TB10.4 and HspX.       We performed an analysis of the genetic stability of inserts in the M. tuberculosis antigen gene NS virus A/PR8/NS124-TB10.4-2A-HspX during serial passages in Vero cells and chick embryos by RT-PCR with electrophoretic detection. In the process of the passage series by the method of limiting dilutions, a genetically stable variant was obtained, which retained the full-length insert. By western blot immunodetection with NS1-specific antibodies was demonstrated expression of the fusion protein NS1-TB10.4-2A-HspX with the theoretical molecular weight of 45 kDa in cells infected with passage variants of the virus A/PR8/NS124-TB10.4-2A-HspX. Based on the results of mass spectrometric analysis, peptides corresponding to NS1 (5 fragments), HspX (6 fragments) and TB10.4 (1 fragment) were found in the chimeric protein composition. When intranasally administered to C57/black/6 mice at a dose of 6 lgEID50/mouse, the vaccine strain had a limited reproduction capacity in the lungs of animals to a titer of 2.0 - 2.3 lgEID50/ml, without causing animal death and weight loss, those was attenuated compared to the original strain A/PR8/34.      As a result of the work performed, a genetically stable recombinant A / PR8 / NS124-TB10.4-2A-HspX strain was obtained, which ensures the expression of M. tuberculosis antigens upon infection of sensitive cells. The strain is safe for laboratory animals and can be used as a vaccine candidate strain for obtaining a vector antituberculous vaccine.
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.language.iso
metadata.value: ru
metadata.name: dc.subject
metadata.value: векторные вакцины
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: туберкулёзные антигены
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: TB10.4
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: HspX
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: белок NS1 вируса гриппа
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: рекомбинантный вирус
metadata.lang: ru_RU
metadata.name: dc.subject
metadata.value: vectored vaccine
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: M. tuberculosis antigen
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: TB10.4
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: HspX
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: influenza NS1 protein
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.subject
metadata.value: recombinant virus
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.title
metadata.value: Molecular and genetic characteristics of influenza-vectored vaccine strain expressing protective proteins from different phases of Mycobacterium tuberculosis life cycle
metadata.lang: en_GB
metadata.name: dc.title.alternative
metadata.value: Молекулярно-биологические характеристики вакцинного штамма на основе гриппозного вектора, экспрессирующего протективные белки различных фаз жизненного цикла Mycobacterium tuberculosis
metadata.lang: ru_RU
resources.filename: st014232.pdf
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/12324/1/st014232.pdf
resources.format: Adobe PDF
resources.description: Article
resources.size: 1,61 MB
resources.filename: reviewSV_Recenziya_Kuchur.docx
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/12324/2/reviewSV_Recenziya_Kuchur.docx
resources.format: Microsoft Word XML
resources.description: ReviewRev
resources.size: 20,81 kB
resources.filename: reviewSV_st002101_Romanovskaya_Ekaterina_Vyacheslavovna_(supervisor)(Ru).txt
resources.url: https://dspace.spbu.ru/bitstream/11701/12324/3/reviewSV_st002101_Romanovskaya_Ekaterina_Vyacheslavovna_%28supervisor%29%28Ru%29.txt
resources.format: Text
resources.description: ReviewSV
resources.size: 5,18 kB